تشخیص لیستریا مونوسیتوژنز در مواد غذایی به روش مولکولی pcr

چکیده سابقه و هدف: لیستریا مونوسیتوژنز یک باکتری گرم مثبت، پاتوژن داخل سلولی اختیاری و علت وقوع مسمومیت های غذایی و همچنین عامل بیماری های شدید در گروه های آسیب پذیر جامعه انسانی می باشد. روش استاندارد برای تشخیص این باکتری کشت میکروبی بوده که این روش بیشتر از 36 ساعت طول می کشد. لذا دست یابی به آزمونی که بتواند در هر شرایطی وجود این باکتری را در نمونه بالینی نشان دهنده، ارزشمند است .لیستریوزیز یکی از مهم ترین بیماری های منتقله از طریق مواد غذائی است. شناسایی سریع و دقیق این باکتری در پیشگیری از موارد عفونت نقش زیادی دارد. هدف از این تحقیق تشخیص سریع مولکولی این میکروارگانیسم با استفاده از ژن hlya به روش مولکولی ,pcr semi-nested pcr می باشد. مواد و روش ها: ابتدا نمونه در محیط مغذی کشت شد و سپس dnaاستخراج و با استفاده از روش pcrمورد ارزیابی قرارگرفت محصول pcrتوسط semi-nested pcr بررسی گردید. ژن hlya به عنوان ژن اختصاصی برای شناسایی لیستریا مونوسیتوژنز انتخاب و از سویه استاندارد لیستریا مونوسیتوژنز ptcc no 1163 استفاده شد. برای بررسی اختصاصیت از باکتری های دیگر مثل کلبسیلا پنومونیه 13883 atcc،3218atcc e.coli ، سالمونلا تیفی 1609 atcc، 25922 e.coli atcc، استافیلوکوکوس آرئوس 25923ptcc و برای استخراج dna از roche kit: cat no. 11 796 828 1 استفاده شد پس از الکترفورز در ژل آگارز 2/1% در دمای اتاق با اتیدیم بروماید رنگ آمیزی و مورد تایید قرار گرفت. محصول pcr، مجدداًpcr شد. یافته ها: در تعیین حساسیت این روش مشخص شد که شناسایی 103 × 6/1 از باکتری در ماده ی غذایی امکان پذیر می باشد. که در همه موارد نتیجه منفی بود. طی pcr اولیه قطعه 200 جفت بازی و در pcr دوم قطعه 138 جفت بازی semi-nested pcr تکثیر گردید. بحث و پیشنهاد: روش مولکولی به کار رفته در این مطالعه از سرعت حساسیت و اختصاصیت لازم برخوردار است و نتیجه گیری نهایی در3 تا 5 ساعت به دست می آید. به کارگیری این روش در آزمایشگاه ها، تشخیص سریع لیستریا مونوسیتوژنز را ممکن می-سازد. واژه های کلیدی: لیستریا مونوسیتوژنز ، ماده غذایی ،pcr، hlya، semi-nested pcr